Nous vous recommandons de toujours stocker l'anticorps comme indiqué sur la fiche technique. Nous ne sommes pas en mesure de garantir les performances de l'anticorps s'il est stocké dans des conditions différentes.
La taille des aliquotes dépendra de la quantité que l'on utilise généralement dans une expérience. Les aliquotes ne doivent pas être inférieures à 10 µl. Plus l'aliquot est petit, plus la concentration est affectée par l'évaporation et l'adsorption de l'anticorps sur la surface du flacon.
Beaucoup de nos anticorps ont des instructions de dilution sur leurs fiches techniques. Dans ces cas, nous vous recommandons de suivre ces instructions. Pour les anticorps qui n'ont pas de dilutions recommandées, nous vous recommandons d'utiliser le tableau ci-dessous pour décider d'une dilution de départ.
| Surnageant de Culture Tissulaire | Ascite | Antisérum Entier | Anticorps Purifié | |
|---|---|---|---|---|
| WB / DB | 1/100 | 1/1,000 | 1/500 | 1 µg/ml |
| FC | 1/100 | 1/1,000 | 1/500 | 1 µg/ml |
| ELISA | 1/1,000 | 1/10,000 | 1/500 | 0.1 µg/ml |
| IHC / ICC | Non Dilué - 1/10 | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 5 µg/ml |
| IP | --- | 1/100 | 1/50 - 1/100 | 1-10 µg/ml |
La plupart des anticorps non purifiés (c'est-à-dire l'antisérum entier, le surnageant de culture ou le liquide d'ascite) n'auront pas de concentration indiquée sur leurs fiches techniques - car elle n'aura pas été déterminée. Ces anticorps peuvent varier de manière significative dans les concentrations d'anticorps spécifiques. En tant qu'estimation approximative de la concentration, le surnageant de culture tissulaire est de 1 à 3 mg/ml, l'ascite est de 5 à 10 mg/ml et l'antisérum entier est de 1 à 10 mg/ml.
Il est important de se rappeler que les dilutions/concentrations dans le tableau ci-dessus sont recommandées simplement comme point de départ. Il peut être nécessaire d'ajuster la dilution/concentration en fonction des résultats expérimentaux.
Nous répertorions toutes les espèces et applications dont nous savons qu'un anticorps a été validé sur la fiche technique.
Nous ne pouvons garantir qu'un anticorps fonctionnera dans une espèce non testée, même si l'alignement des séquences est élevé, car de nombreuses variables sont impliquées pour déterminer si un anticorps se liera à une autre espèce.
Si des données de réactivité croisée sont disponibles pour l'anticorps, elles seront affichées sur la fiche technique sous les rubriques « spécificité » et « réactivité croisée ». Si les données de réactivité croisée ne sont pas disponibles, nous vous recommandons de vérifier l'alignement de la séquence de l'immunogène avec la ou les isoformes ou d'autres protéines qui vous intéressent.
Un outil en ligne pour calculer le pourcentage d'alignement est disponible sur le site Web de l'EMBL-EBI. Vous devrez prendre une copie de la séquence immunogène de l'anticorps et l'aligner avec la séquence protéique de l'espèce que vous souhaitez tester. Nous recommandons un score d'alignement > 85 % comme une bonne indication qu'un anticorps peut réagir de manière croisée. Nous recommandons que le score d'alignement soit bien inférieur à 85 % afin d'indiquer qu'il ne devrait pas y avoir de réactivité croisée.
Chaque numéro de clone représente une lignée cellulaire spécifique clonée à partir d'ascite qui a été utilisée pour fabriquer l'anticorps. Étant donné que les anticorps monoclonaux sont produits par plus d'un hôte et plus d'une lignée cellulaire, chaque lignée cellulaire clonée reçoit un numéro de clone unique pour l'identifier.
Nous répertorions toutes les publications dont nous avons connaissance dans les onglets « Citations ». Nous vous recommandons également de vérifier CiteAb pour voir s'il existe des citations supplémentaires pour un produit particulier.
Les contrôles isotypiques sont utilisés pour confirmer que la liaison de l'anticorps primaire est spécifique et ne résulte pas d'autres interactions protéiques ou d'une liaison non spécifique au récepteur Fc.
L'anticorps de contrôle d'isotype doit correspondre à l'espèce hôte, à l'isotype et à la conjugaison des anticorps primaires. Par exemple, si l'anticorps primaire est une IgG1 de rat conjuguée à la HRP, vous aurez besoin d'un contrôle d'isotype IgG1 de rat conjugué à la HRP.
Nous vous recommandons de vérifier d'abord la fiche technique, qui proposera souvent un contrôle positif. Il est important de s'assurer que le tissu ou la lignée cellulaire utilisé provient d'une espèce testée.
Si aucun contrôle positif n'est suggéré, nous vous recommandons de consulter le site Web d'UniProt. Cette base de données contient souvent une liste de tissus dans lesquels la protéine est exprimée. Ces tissus peuvent être considérés comme des témoins positifs appropriés.
Les anticorps secondaires doivent être dirigés contre l'espèce hôte de l'anticorps primaire que vous utilisez. Par exemple, si votre anticorps primaire est un monoclonal de rat, vous aurez besoin d'un anticorps secondaire anti-rat. Nous vous recommandons de vérifier la fiche technique de l'anticorps secondaire pour vous assurer qu'il a été validé dans l'application que vous utiliserez.
Les fiches techniques contiennent les informations les plus récentes disponibles sur un produit. Lorsque nous trouvons des informations supplémentaires, les fiches techniques sont mises à jour immédiatement, elles ne doivent donc jamais être obsolètes.